多糖检测的一点经验(转载)

取1、2、3、4、5、6六个25ml的容量瓶，分别加入0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml 10.8%的葡萄糖标准液，用二次蒸馏水定容到2ml。然后加入1ml苯酚（6%的），混匀，这里说明下：我原来根据一些文献上说的加5ml，但加入硫酸冷却后老出现沉淀，考虑过很多原因，都被否定掉了。比较合理的解释是苯酚在酸性条件下溶解度降低，所以不能加过量。
$M5B~oTU J*N Wi b;wP!z%u0h)q(J 然后再加入5ml浓硫酸，充分摇匀，放在沸水中煮15分钟，然后用循环水冷却。注：一定要用沸水，在对比性实验中，没用沸水的都出现沉淀，说明反应条件是很苛刻的。*C:Uh&z D{'JBV(b+h
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?-P^O LqPuqu 最后用分光光度法在490nm处检测吸光值。&WnbF;c4T L0U:d
$fLQ[ ?Ug 按照这种方法一定能做出来的，做实验一定要小心，细心。实验用的苯酚，浓硫酸，还有沸水加热都有危险性。&X T
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标准曲线做出来了，再做多糖的检测，方法一样。1hZ{ ^7]t
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附在黄芪多糖加葡萄糖检测方法：
:~@gj1tgw 在黄芪多糖中外加葡萄糖的检测方法
B1SVi:_EO.t 由于用UV的方法无法检测是黄芪多糖本身的葡萄糖还是外加的葡萄糖含量，所以有人就在黄芪多糖中添加葡萄糖以次充好。!{D"\e!xz;ZNK
用80%的酒精醇沉，可以分辨是否外加了葡萄糖。具体方法：-z.Y?$j+_$k6KI
取纯黄芪多糖10克（江苏神天植物原料厂含量70%左右）作为对照品。取对照品5克加葡萄糖作为检测品，各加水60ml稀释，然后各加240ml纯酒精，搅匀静置。9eW4^h4?Z4}
1.              察对照品上清夜为棕红色，底部有黄芪多糖沉淀。检测品上清夜明显变淡，底部黄芪多糖沉淀物明显少于对照品。a;sP/Z%`E]&X
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2.              测上清夜的葡萄糖含量，对照品含量低于测检品的含量。8HY!gM-Nb9y/l
3.              倒去上清夜将沉淀物烘干称重，对照品的重量大于检测品的重量。用对照品的重量除以检测品的重量就可以计算出检测品是否添加了葡萄糖。
`ZZW9[3]9o?'g$U 因为黄芪多糖不溶于80%的酒精，葡萄糖完全溶于80%的酒精。

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恩恩。真好需要。谢谢。

多糖检测是个难点，谢谢楼主分享